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高性价比的CALB牢靠化酶

  • 分类:行业动态
  • 宣布时间:2024-09-06 09:22
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【提要形貌】1988年,科学家从极端的南极情形中疏散到了南极假丝酵母(Candida antarctica),这类酵母可以发生两种脂肪酶,划分为南极假丝酵母脂肪酶A和南极假丝酵母脂肪酶B

高性价比的CALB牢靠化酶

【提要形貌】1988年,科学家从极端的南极情形中疏散到了南极假丝酵母(Candida antarctica),这类酵母可以发生两种脂肪酶,划分为南极假丝酵母脂肪酶A和南极假丝酵母脂肪酶B

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一、CALB简介

1988年,科学家从极端的南极情形中疏散到了南极假丝酵母(Candida antarctica),这类酵母可以发生两种脂肪酶,划分为南极假丝酵母脂肪酶A和南极假丝酵母脂肪酶B[1]。CALB是泉源南极假丝酵母的脂肪酶B,在毕赤酵母中发酵表达获得。该酶能在水相或有机相中高效催化酯水解、酯的合成、酯交流、内酯开环聚合、胺解反映、酰胺的水解与合成及加成反映等,具有较强的手性选择性及位置选择性,普遍用于油脂加工、食物、医药、日化等行业。

1994年,Uppenberg首次确定了CALB的序列及晶体结构,CALB317个氨基酸组成,是一类具有α/β水解酶超家族折叠结构的丝氨酸水解酶[2]。CALB的活性中央由催化三联体(Ser105-Asp187-His224),氧负离子洞和底物团结口袋组成。Ser105 位于β4 股和α4 螺旋的转角处,称为“亲核肘”(nucleophilic elbow)。通常,在α/β水解酶折叠家族中,Ser周围最守旧的序列区域是GXSXG,但在CALB 中,该序列为TWSQG,守旧序列的转变造成“亲核肘”的转角处变宽。His224 位于α9螺旋前端转角处,并指向活性位点。Asp187位于β6股后的转角处,其侧链氧原子与His224 之间形成氢键[2,3]。

实例 1(胺解反映)[4]

实例 2胺解反映-手性拆分)[5]

实例 3(内酯开环聚合反)[6]

实例 4(酯交流反映-羟基位置选择性)[7]

实例 5(酯交流反映-醇的手性拆分)[8]

实例 6(酯合成反映-酸的手性拆分)[9]

实例 7 (酯水解反映-手性拆分) [10]

实例 8(酰胺水解反映) [11]

实例 9 (酰胺合成反映) [12]

实例 10(加成反映) [13]

CALB在水相和非水相中都保留着很强的催化活力,无论在水解,酯化,照旧酯合成反映等方面,CALB都体现出了高于一样平常脂肪酶的催化性能,因而在细腻化工、药物拆分以及有机合成方面有着重大的潜力。

二、CALB催化机理

CALB的催化机理可以用“乒乓机制”来诠释,主要分为两个历程,即酰化和去酰化。在酰化历程中,底物1(例如酯类、碳酸盐等)进入活性位点提供酰基,形成第一个周围体中央体,释放出醇类并形成酰基酶。在去酰化历程中,底物2(例如醇类、半缩醛等)进入活性位点作为酰基受体,天生第二个周围体中央体,释放出酯类和自由的CALB。若是反映在水溶液中举行,则底物2为水[1,14]。

 

三、新利体育生物的CALB牢靠化酶先容

新利体育生物从2007年来就专注于生物酶和生物催化手艺以及合成生物学手艺的开发与应用研究。新利体育生物现有的CALB牢靠化酶为CALB通过疏水作用物理吸附于聚甲基丙烯酸树脂上获得的牢靠化酶,应用于水相或有机相反映中,可到达重复套用的效果,套用次数与反映系统组成有关。我司CALB牢靠化酶产物代号SZ-CALB-IMMO100-ASZ-CALB-IMMO100-B,其中SZ-CALB-IMMO100-A活力可以到达15000U/g。

 

四、参考文献

[1] 王亚婵. 南极假丝酵母脂肪酶B 热稳固性刷新及在黑曲霉中的表达[D]. 无锡:江南大学. 2023.

[2] Uppenberg J, Hansen M T, Patkar S, et al. Structure, 1994, 2(4): 293-308.

[3] J Rotticci-Mulder. Stockholm:Bioteknolog, 2003. 1-74.

[4] Chen S, Liu F, Zhang K, e tal. Tetrahedron Lett, 2016, 57: 5312-5314.

[5] Olah M, Boros Z, anszky G H, e tal. Tetrahedron, 2016, 72: 7249-7255.

[6] Nakaoki1 T, Mei Y, Miller L M, e tal. Ind. Biotechnol, 2005, 1(2):126-134.

[7] Pawar S V, Yadav G D. J. Ind. Eng. Chem, 2015, 31: 335-342.

[8] Kamble M P, Shinde S D, Yadav G D. J. Mol. Catal. B: Enzym, 2016, 132: 61-66.

[9] Shinde S D, Yadav G D. Process Biochem, 2015, 50: 230-236.

[10] Souza T C, Fonseca T S, Costa J A, e tal. J. Mol. Catal. B: Enzym, 2016, 130: 58-69.

[11] Gavil´an A T, Castillo E, L´opez-Mungu´A. J. Mol. Catal. B: Enzym, 2006, 41: 136-140.

[12] Joubioux F L, Henda Y B, Bridiau N, e tal. J. Mol. Catal. B: Enzym, 2013, 85-86: 193-199.

[13] Dhake K P, Tambade P J, Singhal R S, e tal. Tetrahedron Lett, 2010, 51: 4455-4458.

[14] Javier Gonza´lez-Sab?´n, Iva´n Lavandera, e tal. Tetrahedron: Asymmetry, 2006, 17:1264-1274.

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